大肠杆菌也被称为E、coli,是革兰氏阴性,兼性厌氧,棒状的大肠杆菌属细菌,常见于温血生物的下肠。]多数大肠杆菌菌株是无害的,但是一些血清型可以在其宿主中引起严重的食物中毒,并且偶尔会由于食物污染而导致产品召回。无害的菌株是肠道正常微生物群的一部分,可以通过生产维生素K2和防止肠道内病原菌定居使宿主受益,与宿主具有共生关系。在粪便中的大肠杆菌被排出到环境中。该细菌在有氧条件下在新鲜粪便中大量生长3天,但随后其数量缓慢下降。嗜粘蛋白阿克曼氏菌 哈利氏厌氧菌 干酪乳杆菌亚种 DG 副干酪乳杆菌 B21060 长双歧杆菌 88 副干酪乳杆菌 Lpc-37 .鬼伞属菌株
枯草芽孢杆菌的液态发酵是釆用现代发酵技术,将目标微生物菌种接种到生物反应器中进行通风的深层液体培养,其一般工艺流程为:菌种接种培养—种子罐培养—发酵罐发酵培养—收集培养液后处理。由于发酵的基质为液态,发酵时菌体、底物及产物可达到一个均质的状态,这对发酵过程中的检测和控制都是十分有利的;随着科研人员对生物反应器的不断改进,发酵过程中的无菌环境得以保证,使得产品质量稳定性很高;此外,液态发酵易扩大生产规模,生产过程中液体输送方便,易于机械化操作,适合工业化生产的发酵工艺。威氏李斯特氏菌菌种如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长,铜绿假单胞菌在液体表面形成菌落。
大肠杆菌摇瓶发酵常用的化学合成培养基有LB、SOB、SOC等。培养基中通常含有碳(能)源、氮源,以及微营养物如微生物和微量元素,这些营养物的浓度与比例,对实现生产重组微生物的高密度发酵是很重要的。培养基中复合氮源的种类对重组大肠杆菌的高密度发酵也很重要。在某些情况下,向培养基中添加一些营养物质能提高生产率。这些营养物的作用可能是作为产物前体,也有可能是阻止产物的降解。发酵过程:1、种子活化:将保存于-80℃的种子甘油菌室温解冻,取500ul菌接入50mlLB培养基,再加入相对应的筛选抗性,37℃培养7h。2、上罐:将上步活化的种子50ml接入3L发酵培养基中,设定温度,空气流量,压力值,监控DO与PH值。3、从发酵4小时开始,每隔1h进行取样检测OD,当OD值≥40时,开始诱导。4、诱导物:IPTG(1mol/L,过滤除菌),加入4ml,至终浓度达到1mmol/L,诱导阶段温度控制再35℃,其他条件不变,诱导10小时。5、诱导结束,放罐,5000rpm离心,收集菌体,于-80℃冰箱保存。
大肠杆菌生物学特征:1、理化特性。大肠杆菌是短杆菌,两端呈钝圆形,革兰阴性。有时因环境不同,个别菌体出现近似球杆状或长丝状。大肠杆菌多是单一或两个存在,但不会排列呈长链形状。大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构,但是不能形成芽孢。多数大肠杆菌菌株生长有菌毛,其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛。2、生化特性。大肠杆菌的生化代谢非常活跃。大肠杆菌可以发酵葡萄糖产酸、产气,个别菌株不产气,大肠杆菌还能发酵多种碳水化合物,也可以利用多种有机酸盐。大肠杆菌在常用的生化特性检测项目中,甲基红试验呈阳性,吲哚产生和乳糖发酵是阳性(个别菌株表现阴性),维-培试验是阴性,尿素酶和柠檬酸盐利用呈阴性(极个别菌株表现阳性),硝酸盐还原试验表现阳性,氧化酶表现阴性,氧化-发酵试验表现为F型[1]。铜绿假单胞菌为革兰氏阴性,不产芽胞。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)属葡萄球菌属(Staphylococcus),是重要的革兰氏阳性条件性致病菌。典型的金黄色葡萄球菌呈球形,排列成葡萄串状,在液体培养基中常呈双或短链状排列。无鞭毛及芽孢,幼龄菌可见荚膜。一般来说,金黄色葡萄球菌生长的较适温度为37℃。金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,能形成湿润、光滑、隆起的圆形菌落,因为含类胡萝卜素,所以常呈柠檬色及黄色。在有氧或培养基中含牛乳、血清时可产生更多的色素。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球也称“金葡菌”,隶属于葡萄球菌属。短杆状马赛菌
铜绿假单胞菌的O抗原包含脂多糖,有特异性。鬼伞属菌株
铜绿假单胞杆菌的载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当普遍。寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内影响并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30摄氏度,-50-80摄氏度)、干冰酒精快速冻结(约-70摄氏度)和液氮(-196摄氏度)等保藏法。冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70摄氏度左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。鬼伞属菌株
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