金黄色葡萄球菌产生的耐热性肠有害元素简称SEs,是由血浆凝固酶或耐热核酸酶阳性的菌株所产生的一类结构相关、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白质。有A-E、G-V及X型(即SEA等),其中C型抗原又分为3个亚型(C1、C2、C3),SEG、SEI、SEK为新发现的肠有害元素。所有的有害元素都有以下共同特性:具有引起急性胃肠炎的能力(催吐性);刺激非特异性T细胞增殖的超抗原特性;对热和蛋白酶消化作用的抵抗能力(即肠有害元素对热和水解酶的变性都有很高的耐性);分子内都存在二硫键。在铜绿假单胞菌中,绿脓素的生物合成是以群体效应来调控。谢瓦曲霉菌株
金黄色葡萄球菌对宿主的传染分为粘附、侵入两个阶段。金黄色葡萄球菌侵染宿主的不同阶段,需要不同的致病因子发挥作用。在传染的早期阶段,它主要通过纤维蛋白原,纤连蛋白和细胞角蛋白定植在机体的表皮内。在指数阶段的早期,它会产生细胞壁相关因子,使菌体积聚并形成生物膜,促进其对宿主细胞或组织粘附以及逃避宿主免疫系统的清理。一旦菌体达到指数期后期,它便开始下调细胞壁相关因子,使生物膜分散,同时分泌出一系列外蛋白,包括蛋白酶、溶血素、超抗原等,传染宿主细胞或组织。在侵染机体的整个过程中,金黄色葡萄球菌表面蛋白在生物膜形成、突破宿主防御系统、免疫逃避等方面发挥重要作用,这些表面蛋白是现阶段金黄色葡萄球菌疫苗研究目标之一。杆状脱硫微菌菌株铜绿假单胞菌的o抗原含有内毒养素和原内毒养素蛋白质两种成份。
在铜绿假单胞杆菌中,单层冻干管的开启和菌种复苏方法:用浸过百分之七十的酒精的脱脂棉擦净安瓿管。将冻干管放在火焰上加热。滴少量无菌水至加热处使之破裂。用锉刀或镊子轻轻敲下安瓿管顶端,并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。用无菌吸管吸取0.1毫升-0.2毫升无菌水或适量的液体培养基,滴入管内。待安瓿管内的牛奶菌粉溶解呈悬浮状,再用无菌吸管,吸取全部菌悬液接在1-2支建议的斜面培养基或者1个建议的平板培养基上,并在建议的温度下培养。铜绿假单胞杆菌从恢复时开始,取出-196摄氏度的液氮并冷冻保存管,立即投入37~40摄氏度温水温度差较大,玻璃安瓿瓶容易发生炸裂的危险。
铜绿假单胞菌的液氮较低温保存法,将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中,密封于安瓿管内,然后控制冷却速度,使安瓿管温度逐步下降至-35摄氏度时,即可置于-150摄氏度~-196摄氏度的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物,都可用此法保存。微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染,斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时更换新的菌种。铜绿假单胞菌菌种不能在4-10度条件下储存,容易死亡。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)也称“金葡菌”,隶属于葡萄球菌属,是革兰氏阳性菌表示,为一种常见的食源性致病微生物。该菌较适宜生长温度为37℃,pH为7.4,耐高盐,可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中,空气、污水等环境中也无处不在。金黄色葡萄球菌形态为球形,在培养基中菌落特征表现为圆形,菌落表面光滑,颜色为无色或者金黄色,无扩展生长特点,将金黄色葡萄球菌培养在哥伦比亚血平板中,在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。金黄色葡萄球菌在显微镜下排列成葡萄串状,金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛,大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。铜绿假单胞菌普遍存在,而在潮湿环境尤甚。牛奶类芽胞杆菌菌株
大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构,但是不能形成芽孢。谢瓦曲霉菌株
铜绿假单胞杆菌使用应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2、Mg2和血清、蛋白质克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2、Mg2的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。细胞消化时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响;消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。细菌生物膜在铜绿假单胞菌影响中普遍存在,是导致抗抵菌疗养失败的重要原因之一。谢瓦曲霉菌株
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